温郁金SCoT-PCR反应体系的正交优化

以温郁金为试材，运用L25(56)正交设计在5个水平上对影响温郁金SCoT-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTPs、Taq酶和引物5个因素进行优化试验，对PCR结果进行极差分析。建立并优化温郁金的目标起始密码子多态性聚合酶链式反应（SCoT-PCR）体系，以期为温郁金的遗传多样性分析及分子鉴定等研究提供技术支持。结果表明建立了温郁金SCoT-PCR的最佳反应体系（20μL）引物0.8μmol/L，dNTPs0.4mmol/L，Mg2+1.5mmol/L，Taq酶0.5U，模板DNA40ng，且确定各因素对温郁金SCoT-PCR反应效果的影响大小依次为dNTPs>Taq酶>引物>Mg2+>模板DNA，其中dNTPs对体系影响最大。优化的温郁金SCoT-PCR反应体系在多个温郁金品种遗传多样性研究中得到了验证，结果表现出良好的稳定性、重复性和多态性丰富等特点，可用于今后温郁金品种遗传多样性分析、系统发育分析、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究。