板栗MADS-box基因的分离及RNAi表达载体构建

以中国罗田板栗品种“玫瑰红”的幼叶和花为试材，采用EST数据库分析，结合RACE技术从板栗中分离到MADS基因的cDNA全长序列并构建了其RNA干扰载体，研究开花关键基因对板栗花芽分化的影响。结果表明CmMADS基因全长为922bp的CmMADS的cDNA序列，该序列含有1个681bp的可读框，编码227个氨基酸序列。生物信息学预测CmMADS蛋白的分子质量为25.87kDa，理论等电点为6.27，N端具有M盒保守序列，其二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成。蛋白质同源分析表明，CmMADS含有M盒和K盒2个特征性序列区域。同源建模分析显示CmMADS序列与苹果MADS蛋白的三维结构及活性位点高度相似。系统进化分析表明，板栗MADS蛋白归属植物进化分支，且与太行花的MADS蛋白归为一支。将CmMADS基因2段相同长度(283bp)的反向互补片段RMADS和FMADS连入载体pBluescriptSKplus，构成中间载体pBluescriptSKplus-FR。用BanHI和KpnI同时酶切中间载体pBluescriptSKplus-FR和植物表达载体pCl301-ubi，回收pBluescriptSKplus-FR的酶切小片段，连入pC1301-ubi大片段中，构成植物表达载体pC1301-ubi-CmMADS-RNAi。下一步拟用构建好的RNA干扰载体转化农杆菌并由其介导将重组质粒转入烟草，为深入研究该干扰载体的功能及CmMADS基因的功能提供参考。