茶花品种ISSR指纹图谱反应体系建立与优化

以30个茶花品种为试材，采用5因素4水平正交实验以及单因素优化试验方法，研究Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度和模板DNA浓度对ISSR-PCR指纹图谱条带清晰度的影响，以进行茶花品种ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选。结果表明茶花品种ISSR-PCR最适扩增条件为25μL反应体系中，Mg2+3.0mmol/L、dNTPs0.2mmol/L、引物0.3mmol/L、TaqDNA聚合酶0.5U、模板DNA80ng以及52.1℃退火温度；试验从100个ISSR引物中筛选出12个适用引物；并对12个ISSR引物的多态性和稳定性进行了检验。