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栓皮栎ISSR反应体系的建立
, PP. 93-97
Keywords: 栓皮栎 ,ISSR ,体系优化 ,遗传多样性
Abstract:
以栓皮栎叶片为试材，采用单因素试验设计对栓皮栎ISSR反应条件进行系统优化，建立了栓皮栎ISSR的最佳反应体系和扩增程序。结果表明PCR反应体系总体积为25μL，其中10×Buffer2.5μL，30ng模板DNA，1.5UTaq聚合酶，2.5mmol/LMg2+，0.6μmol/L引物，0.3mmol/L?dNTPs；扩增程序94℃预变性1min；94℃变性30s，51.5～59.0℃退火60s，72℃延伸2min，35个循环；最后72℃延伸5min。在此条件下从100条ISSR引物中筛选出12条多态性好、稳定性高的引物对陕西省天然群体共22个栓皮栎个体的DNA进行扩增，共得到166个位点，其中142个为多态位点，多态位点百分率为85.54％，Nei指数为0.2928，Shannon信息指数为0.4381，表明栓皮栎的遗传多样性处于较高水平。
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