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重庆大学学报 2006
从寄主昆虫血淋巴中分离纯化病原真菌菌体的方法DOI: 10.11835/j.issn.1000-582X.2006.10.026 Abstract: 采用正交实验方法，对东亚飞蝗（Locustamigratoria）血细胞裂解及其DNA和RNA降解的条件进行了优化．在优化条件下，不仅去除了感病东亚飞蝗血淋巴中的血细胞及DNA和RNA。而且成功地分离和纯化了绿僵菌（Metarhiziumanisopliae）菌体．裂解血细胞及其DNA和RNA的最佳酶解条件为：蛋白酶K的浓度为1mg／mL，作用温度为26℃，时间为60min，脱氧核糖核酸酶（DNAaseI）的用量为5U，核糖核酸酶（RNAaseA）的浓度为0．5mg／mL，作用时间为35min，作用温度为30℃．以蝗虫特异引物进行PCR及RT-PCR检测结果表明，从绿僵菌侵染后的蝗虫血淋巴中分离纯化无蝗虫DNA和RNA污染的绿僵菌菌体，为后续分离和克隆绿僵菌侵入蝗虫体内后表达的基因，研究它们在致病机理中的作用奠定了基础．
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