中国蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库的构建

为研究中国蛇岛蝮蛇(Gloydiusshedaoensisshedaoensis)基因工程产品,采用SMART(switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术构建其毒腺的cDNA表达文库。采用RNAiso试剂提取毒腺总RNA,再采用Poly(A)PuristTM试剂盒分离纯化mRNA,第一链cDNA经反转录合成,双链cDNA经LD-PCR合成并扩增;分级分离去除小片段,收集大于400bp的cDNA片段,与质粒载体pDNR-LIB连接,采用电转化法将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞DH10B。构建的蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库库容量为8×107cfu/ml,大多数插入片段大于1000bp,重组质粒表达率高(100%)。本研究成功构建了高质量的蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库,表达文库质量高,可用于进一步克隆和表达中国蛇岛蝮蛇蛋白活性组分基因,并对其功能进行研究。