日本三角涡虫热休克蛋白70(DjHSP70)C-端多肽表达及其抗血清制备

首先运用在线生物学软件对日本三角涡虫(Degusiajaponica)热休克蛋白70(DjHSP70)氨基酸序列进行亲水区分析,发现该蛋白C-端含有较多亲水性氨基酸,然后以该段多肽序列为基础构建原核表达载体。采用PCR方法扩增450bpcDNA片段,编码DjHSP70C-端150个氨基酸多肽。将双酶切的cDNA片段与pET-28a载体连接后导入BL21受体菌,在IPTG诱导下表达出21ku融合蛋白,分子量与预期相符。该融合蛋白采用Ni2+-NTAagarose树脂进行纯化,纯化结果电泳检测后经灰度扫描分析显示纯度在95%以上。融合蛋白免疫新西兰大白兔获得高效价的抗血清,Westernblot检测显示该抗血清不仅具有很强的特异性,而且还识别小鼠HSP70。此项工作为进一步研究淡水涡虫抗逆性奠定了基础。