建鲤leptin两种原核表达载体的构建和表达

使用SignalP-4.0软件预测信号肽剪切位点，设计引物扩增建鲤（Cyprinuscarpiovar.jian）leptin基因（jlLEP-A1，jlLEP-B）不含信号肽的ORF区域。扩增产物分别连接到pET-32a（+）和pGex-4T-1原核表达载体，构建重组质粒，测序验证插入位点的正确性。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达重组蛋白pET-32a（+）/jlLEP-A1，pET-32a（+）/jlLEP-B和pGex-4T-1/jlLEP-A1，pGex-4T-1/jlLEP-B。结果表明，在37℃和1mmol/LIPTG的条件下诱导5h，重组蛋白表达量最大。SDS-PAGE电泳显示重组蛋白主要以可溶蛋白形式存在。这一结果为后续的建鲤leptin基因功能研究奠定了基础。