聚乙二醇修饰重组人肿瘤坏死因子-α的合成和分离纯化

分别以重组人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NHS2PEG2MAL的摩尔比为1:5、1:20、1:40、1:60,于不同时间下进行PEG化反应。反应混合物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定和ImageMaster图象分析系统定量凝胶中游离蛋白质,评价蛋白质PEG化程度;采用灌注色谱技术,通过阳离子交换柱分离纯化反应混合物。结果显示:SDS-PAGE法可使游离TNF-α与PEG-TNF-α达到完全分离;TNF-α的PEG化程度随PEG量和反应时间的增加而提高。反应混合物被阳离子交换柱分离成PEG、PEG-TNF-α混合物和游离TNF-α。