超声波破碎-高效液相色谱法定量检测核酸

采用超声波破碎结合高效液相色谱技术,建立了定量检测质粒DNA的方法,测量结果可以溯源至核苷酸标准物质。采用超声波破碎(功率300W,频率24kHz)技术将质粒DNA破碎成200～500bp的小片段DNA,再用蛇毒磷酸二酯酶将其水解为4种核苷酸(dCMP:3.2min;dTMP:4.7min;dGMP:5.3min,dAMP:6.8min),将产物通过HPLC分离后,采用外标法进行定量分析。应用此方法对待测质粒pNK603进行定量分析,测定的4种核苷酸的摩尔百分比(A:T=0.95,C:G=0.98)与理论值接近。本方法的测定结果(47.24μg/g)与实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR,45.98μg/g)和PicoGreen荧光染料法(46.02μg/g)的测定结果没有显著差异,表明建立的超声波-HPLC方法可以应用于质粒DNA的定量分析。