支化滚环扩增均相光散射检测单核苷酸多态性

结合简便、高效的支化滚环扩增反应与光散射技术,建立了一种均相、无标记检测单核苷酸多态性的方法。通过设计与突变型DNA完全匹配的锁式探针,突变型DNA可作为模板,使锁式探针在连接酶作用下于45℃连接成环,由Phi29DNA聚合酶在33℃引发支化滚环扩增反应,生成大量的长链DNA产物。反应产物在0.2mol/LHClO4介质中变性、聚集,产生强烈的光散射信号。野生型DNA与锁式探针的3%末端有一个碱基错配,不能使锁式探针连接成环和引发支化滚环扩增,仅产生很弱的光散射信号。依据二者产生的光散射信号差异,可特异性区分单碱基差别。方法灵敏度高、成本低,可准确测定1pmol/L突变型DNA和定量检测基因突变频率。所有的成环反应、支化滚环扩增反应及光散射测定可逐步完成,无需分离、洗涤步骤,操作方便、减小了污染的风险。