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抗拟除虫菊酯类农药广谱性单克隆抗体的研制及鉴定
DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.140081
Keywords: 拟除虫菊酯类农药 ,广谱特异性 ,单克隆抗体 ,酶联免疫吸附法
Abstract:
制备了抗拟除虫菊酯类农药（Pyrethroids）的广谱性单克隆抗体，并鉴定其免疫学特性；以间苯氧基苯甲酸（PBA）为半抗原，用活性酯法将其与牛血清蛋白（BSA）偶联制得人工抗原PBA-BSA免疫Balb/c小鼠，5次免疫后选择效价最高、对PBA识别能力最强的小鼠取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG1500作用下融合，经间接ELISA筛选及有限稀释法进行亚克隆，分离阳性细胞株，腹水诱导法大量制备单克隆抗体，并用ProteinG亲和柱纯化，间接ELISA法测定抗体效价、亚型、亲和力常数及对拟除虫菊酯类农药的作用；UV结果显示，PBA-BSA成功偶联，获得1株稳定分泌抗拟除虫菊酯类农药单克隆抗体的杂交瘤细胞株4H11，其培养腹水抗体效价为1：6.5×106，其抗体亚类为IgG1，对PBA的亲和力常数为2.5×10L/mol，对PBA的IC50为208.9μg/L，检出限为21μg/L，对高效氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氰戊菊酯和氯氰菊酯的IC50分别为1.01，2.15，3.16和3.67μg/L。
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