氧氟沙星噬菌体库的构建、筛选及抗体结构模拟

应用噬菌体展示和重组抗体技术制备抗氧氟沙星单链抗体（scFv）库，筛选获得氧氟沙星特异性噬菌体scFv以及同源模拟其三维结构。将从氧氟沙星杂交瘤细胞提取的总RNA，用RT-PCR反转录合成cDNA，以针对鼠源重链可变区（VH）及轻链可变区（VL）基因的兼并引物，扩增获得VH和VL可变区基因，通过SOE-PCR法将VH基因和VL基因通过柔性多肽Linker（Gly4Ser）3拼接成全长scFv基因片段，将双酶切后的scFv基因片段插入T7噬菌体，经体外包装后转化宿主菌BLT5403，成功构建库容量为3×105pfu/mL的抗体库，经4轮吸附-洗脱-扩增的富集，采用直接竞争ELISA筛选到4个特异性噬菌体scFv，运用Expasy软件模拟特异性scFv的三维结构。为进一步大量表达氧氟沙星单链抗体奠定了基础。