基于蛋白质组学的细胞色素P450和葡萄糖醛酸转移酶亚型绝对定量分析

利用蛋白质组学方法，将大鼠肝微粒体样品进行胰蛋白酶水解；再利用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS），采用多反应监测模式（MRM），通过测定蛋白质水解后产生的特征酶切肽段，实现同时对大鼠肝微粒体内药物代谢酶P450和UGT的绝对定量。本实验首先建立标准工作曲线，对肝微粒体样品中P450和UGT进行定量，在线性范围内，相关系数r>0.995，线性关系良好，定量限≤10nmol/L；以合成的稳定同位素标记特征肽段作为内标，对UGT1A1进行定量分析。结果表明，同位素标记特征肽段与未标记肽段色谱行为与质谱响应一致，在基质溶液中同位素标记肽段线性关系良好，利用标准曲线法和稳定同位素稀释法测得UGT1A1含量分别为17.30和18.23nmol/g，两种方法所得结果基本一致，但稳定同位素稀释法操作简便，更适用于复杂样品的高通量测定。