大肠杆菌O157:H7微滴数字PCR定量方法的建立

以大肠杆菌O157:H7(E.coliO157:H7)rfbE基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR(ddPCR)方法。对ddPCR反应中的探针浓度进行了优化,考察了方法的线性范围、精密度、定量限和检出限。最终确定ddPCR反应中的最佳探针浓度为300nmol/L。E.coliO157:H7基因组DNA浓度范围为4~1.25×105拷贝/20μLddPCR反应液时,ddPCR方法线性相关系数(R2)为0.999。当DNA浓度为760~88400拷贝/20μL时,方法的精密度最好(RSD<5%)。本方法的定量限为4拷贝/20μL,检出限为3拷贝/20μL。特异性验证结果表明,建立的ddPCR方法特异性良好,对13份猪肉、牛肉和鸡肉样品的检测结果与定量PCR方法检出结果一致。