三氧化二砷诱导小鼠肝癌细胞H22外泌exosome及相关机制研究

目的探讨三氧化二砷在小鼠肝癌细胞H22外泌exosome中的影响。方法MTT法筛选三氧化二砷的合适药物浓度;密度梯度离心和超速离心法提纯exosome，Bradford法对exosome总蛋白进行定量分析；Westernblot检测影响小囊泡vesicle分泌的复合体SNARE的重要组成及调节蛋白Syntaxin的表达；结合钙荧光探针Fura-2、荧光倒置定量显微镜测定细胞内游离钙的相对浓度。结果维持小鼠肝癌细胞H2290%存活48h的药物浓度为1.25μmmol/L；药物作用前后，细胞数为5×104ml-1的H22细胞常规培养48h所得细胞悬液200ml，经密度梯度离心和超速离心所得exosome的总蛋白浓度分别为（0.85±0.13）、（0.96±0.10）mg/ml,差异具有统计学意义（P<0.05）;三氧化二砷作用前后，H22细胞均有Syntaxin蛋白表达，三氧化二砷处理后，其表达明显增加（P<0.05）。结论SNARE复合体假说也适用于小鼠肝癌细胞H22的exosome外泌过程，三氧化二砷在exosome的外泌过程中有一定的促进作用。