短发夹RNA干扰胃癌低氧诱导因子-1α表达及其临床意义

目的探讨RNA干扰对胃癌细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）转录和蛋白表达的作用以及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建人HIF-1α基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并转染胃癌细胞BGC-823；采用RT-PCR和Westernblot法检测HIF-1αmRNA、蛋白表达水平；MTT法检测转染后对胃癌细胞生长的抑制；TUNEL法观察细胞的凋亡情况；流式细胞术分析转染后胃癌细胞的细胞周期和凋亡率。结果成功构建了pshRNA-HIF-1α1和pshRNA-HIF-1α2重组质粒；转染BGC-823后，与空质粒组相比，pshRNA-HIF-1α1可有效抑制BGC-823细胞HIF-1α基因转录和蛋白质表达，抑制率分别可达93.4％和55.7%；MTT法显示转染后细胞生长明显受到抑制；流式细胞术结果表明转染后，其凋亡率明显高于空质粒组（P<0.05），BGC-823细胞增殖活性显著降低,G0～G1期细胞比例明显增加，S期与G2～M期细胞比例减少；TUNEL法显示转染后细胞核固缩，核染色质聚集或断裂；体内实验显示，pshRNA-HIF-1α1的抑瘤率为41.75%。结论体内、外初步实验证实pshRNA-HIF-1α1能有效抑制胃癌细胞BGC-823HIF-1α基因表达，抑制胃癌细胞增殖，诱导其凋亡。