曲古菌素A上调食管癌CAR的表达及增强溶瘤腺病毒转染效率的体外研究

目的通过观察组氨酸去乙酰化酶（histonedeacetylase，HDAC)抑制剂曲古菌素（trichostatinA,TSA）对食管癌细胞株EC9706膜表面柯萨奇-腺病毒受体（Coxsackieandadenovirusreceptor，CAR）表达水平的影响，观察TSA能否通过上调食管癌EC9706CAR表达而增强其对腺病毒基因转染效率。方法采用免疫细胞组织化学、RT-PCR、Westernblot检测食管癌EC9706细胞CAR的表达情况，再用上述方法检测TSA作用EC9706细胞后，CARmRNA和CAR蛋白表达的改变；同时采用流式细胞术测定病毒转染效率，MTT实验评价腺病毒携带的胸苷激酶（Ad-TK)的体外抗瘤效应。结果0.5μmol/LTSA处理EC9706细胞12、24、48h后，CARmRNA和蛋白表达量[分别为（0.44±0.01）、（0.37±0.02）,（0.66±0.04）、（0.58±0.01）,（0.77±0.05）、（0.70±0.03）]与未加TSA处理组[(0.27±0.02)、(0.22±0.03)]相比，CARmRNA和蛋白表达水平显著提高（P<0.05，P<0.01），呈现出时间依赖关系。流式细胞仪分析Ad？GFP转染后GFP的表达发现，未加TSA处理细胞转染效率为(1.35±0.11)%，0.5μmol/LTSA作用12、24h和48h后，细胞转染效率分别为（2.58±0.17）%、（4.96±0.14）%、（6.36±0.15）%。MTT检测Ad-TK介导的体外杀伤作用结果显示，0.5μmol/LTSA作用48h比未加TSA增强8倍。结论TSA通过上调CAR表达量从而增强腺病毒对食管癌细胞的腺病毒基因转染效率。