真核表达载体pEGFP-N1-hSyntenin的构建及其在人脑胶质瘤细胞CHG-5中的表达

目的　构建pEGFP-N1-hSyntenin基因真核表达载体，并观察其在人脑胶质瘤细胞CHG-5中的表达。　方法　采用RT-PCR技术从人脑肿瘤组织中扩增hSyntenin，并将PCR产物双酶切后定向克隆入pEGFP-N1的多克隆位点，构建pEGFP-N1-hSyntenin重组质粒。经过菌落PCR、双酶切及测序验证后，采用脂质体转染技术将pEGFP-N1-hSyntenin融合基因转染CHG-5细胞表达，G418筛选建立稳定表达hSyntenin的CHG-hS细胞系。采用荧光检测和免疫印迹技术分析hSyntenin在稳定转染的CHG-5细胞系中的表达。　结果　菌落PCR鉴定出1个阳性克隆，阳性克隆经双酶切鉴定得到分别与载体和目的片段大小一致的4．7kb和897bp的两条片段，测序证实目的基因hSyntenin正确连接到pEGFP-N1的多克隆位点；pEGFP-N1-hSyntenin重组体稳定转染CHG-5细胞后，细胞荧光检测结果显示hSyntenin在CHG-5细胞质发出绿色荧光，免疫印迹检测可见32×103处的阳性条带。　结论　成功构建pEGFP-N1-hSyntenin重组质粒，并在人脑胶质瘤细胞CHG-5中获得稳定表达。