rAQP4-M1真核表达载体的构建及在CHO细胞中的表达

目的构建rAQP4-M1基因真核表达载体，建立稳定转染AQP4-M1的CHO细胞系。方法应用RT-PCR从大鼠脑组织中扩增rAQP4-M1，并将PCR产物双酶切后插入到pcDNA3．1(+)真核表达载体中，经过菌落PCR、双酶切及测序验证的pcDNA3.1(+)／rAQP4-M1质粒通过脂质体转染CHO细胞。G418筛选建立稳定转染rAQP4-M1的CHO细胞系。采用细胞免疫荧光和免疫印迹技术检测rAQP4-M1在该细胞系中的表达。结果成功构建了pcDNA3.1(+)／rAQP4-M1表达质粒，建立了稳定转染的CHO细胞系。免疫荧光检测结果显示，rAQP4-M1在CHO细胞膜上稳定表达；免疫印迹检测可见34×103处的阳性条带，表明rAQP4-M1在该细胞系中成功表达。蓝绿温和胶电泳技术证实了rAQP4-M23而不是rAQP4-M1参与了正交排列颗粒(orthogonalarraysofparticles，OAPs)的形成。结论rAQP4-M1在CHO细胞系中稳定表达成功，rAQP4-M1未参与OAPs的形成。