大熊猫核糖体蛋白L10亚基基因的cDNA克隆及序列分析

目的了解大熊猫(ailuropodamelanoleuca)核糖体蛋白L10亚基基因(RPL10)的结构特点及其与已报道的人和其他哺乳动物核糖体蛋白亚基RPL10基因的异同。方法根据已报道的部分哺乳动物RPL10基因的相关信息设计引物，运用RT-PCR技术，从大熊猫的肌肉组织总RNA中对核糖体蛋白亚基RPL10基因的进行克隆、测序；采用Genescan软件，对所克隆的基因序列进行氨基酸序列推定；采用ORFfinder软件进行DNA序列的开放阅读框查找；采用DNAMANVersion6软件，对基因序列和氨基酸序列进行同源性比较；采用Ex2PASyProteomicsServer软件，进行蛋白质功能位点和生化特性预测分析；采用http://www.imtech.res.in/raghava/apssp2/对蛋白质二级结构进行模拟分析。结果大熊猫RPL10基因的表达序列长为685bp，开放阅读框(ORF)为645bp，编码214个氨基酸的蛋白质，该蛋白的相对分子质量为24.5997×103，等电点为10.74，含有4个功能位点，分别为：2个蛋白激酶C磷酸化位点，2个N化位点，2个酰胺化位点，1个核糖体蛋白L10e信号位点。进一步分析发现，该基因的表达序列及其编码的氨基酸序列与已报道的人、牛、家犬、褐家鼠、小家鼠有很高的相似性，其表达序列同源性分别为92.4%、92.4%、97.21%、88.84%与89.61%；其编码的氨基酸序列除与牛的同源性为99.07%外，与其他哺乳动物同源性为100%。而且，其蛋白质的高级结构除牛外其他物种也具有一致性。结论无论是从RPL10基因的序列、结构、功能位点，还是从其编码的氨基酸的序列和二级结构进行分析，都表明大熊猫的RPL10基因和已报道的哺乳动物的RPL10基因具有高度的遗传稳定性和功能一致性。