RNAi抑制XIAP基因诱导MG63细胞凋亡、化疗增敏及其分子机制

目的观察RNAi技术抑制X染色体连锁凋亡抑制蛋白（X-linkedinhibitapoptosisprotein，XIAP）基因对MG63细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响，并探讨其分子机制。方法构建XIAP基因的shRNA稳定表达载体,将MG63细胞分为空白组（A组，不作转染），阴性对照空白质粒转染组（B组，psiRNA-Con转染组），实验组（C组，psiRNA-XIAP转染组），在此基础上又设A+阿霉素（doxorubicin，Dox，0.3μmol）、C+Dox两化疗药物干预组；Westernblot检测XIAP蛋白的表达，MTT检测细胞的增殖情况，流式细胞术检测细胞周期、凋亡及Caspase-9蛋白的表达情况。结果与A、B组比较，C组细胞XIAP蛋白水平、细胞增殖活性明显降低(P<0.05)，细胞凋亡率、Caspase-9蛋白表达及G2/M期细胞明显增多(P<0.05)。A+Dox组较C+Dox组细胞增殖活性更低，且Dox对A、C组细胞的抑制呈时间依赖性；Caspase-9蛋白表达明显增高(P<0.05)；细胞周期出现G2/M为0，细胞阻断于S期。结论RNAi能有效抑制XIAP基因表达，抑制骨肉瘤细胞增殖活性，诱导其凋亡，并增加其对化疗药物的敏感性，其机制可能涉及抑制DNA合成及Caspase家族凋亡信号转导通路的活化。