RNA干扰survivin基因增强SKBr-3细胞对多柔吡星敏感性的体外研究

目的探讨抑制survivin基因的表达对人乳腺癌SKBr-3细胞化疗敏感性的影响。方法构建针对survivin基因序列特异性shRNA的表达载体，脂质体转染SKBr-3，G418筛选阳性克隆。实验分为RNA干扰组（S1&P），脂质体对照组(H1&P)和空白对照组。光镜观察转染后细胞的形态变化；0.5μg/ml多柔吡星作用于转染后的细胞，电镜观察细胞形态学变化；TUNEL染色、AnnexinV荧光标记检测细胞凋亡，MTT法检测细胞增殖的抑制率。结果成功构建具有新霉素抗性的靶向survivin的序列特异性shRNA表达载体，基因测序完全正确；转染后干扰组细胞均发生细胞凋亡的形态学改变；低剂量多柔吡星诱导后，TUNEL染色结果，S1&P组凋亡细胞比例（23.6±4.8）%明显高于H1&P组(4.1±1.1)%和空白对照组(3.2±1.4)%（P<0.05），表明转染了RNA干涉载体的SKBr-3细胞对低剂量多柔吡星的敏感性显著增加；Annexin-V染色结果：空白对照组凋亡比例为（17.43±3.12）％，H1&P组为（20.51±4.67）％，S1&P组为（68.76±8.49）％，后者与前两者比较均有统计学差异（P<0.05）。干扰组细胞凋亡率、细胞增殖的抑制率均明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外实验证实抑制survivin基因的表达可提高乳腺癌SKBr-3细胞对多柔吡星的敏感性。