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第三军医大学学报 2010
pCS2+-FLASH重组质粒的构建及斑马鱼FLASH基因反义mRNA探针的制备, PP. 1119-1120 Keywords: 斑马鱼,pCS+,FLASH,反义mRNA Abstract: 目的构建斑马鱼pCS2+-FLASH重组质粒，制备斑马鱼FLASH反义mRNA探针。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼FLASH基因片段，将得到的FLASH片段和pCS2+质粒用BamHⅠ及HindⅢ双酶切后插入pCS2+质粒，通过对重组质粒进行双酶切及插入片段序列测序鉴定后，经T3RNA体外转录体系合成DIG-FLASH基因反义mRNA探针。结果RT-PCR法扩增出长度为533bp的特异性产物，构建的pCS2+-FLASH重组质粒经酶切鉴定和测序结果与预期相符；用FLASH反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交，观察到FLASH在野生型斑马鱼神经系统中存在表达。结论成功构建了pCS2+-FLASH重组质粒及FLASH基因反义mRNA探针。
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