腺病毒介导CTLA4Ig转染正常人肝细胞株的研究

目的　研究腺病毒介导CTLA4Ig基因转染正常人肝细胞株L02后，CTLA4Ig在L02细胞内的表达、生物学活性以及对L02细胞生物学特性的影响。　方法　重组腺病毒载体Ad-CTLA4Ig-EGFP转染体外培养的正常人肝细胞株L02，观察绿色荧光在细胞内的表达情况。以免疫细胞化学、Westernblot、ELISA等方法检测CTLA4Ig在L02细胞内、外的表达情况；通过绘制细胞生长曲线、检测尿素合成能力观察转染前后L02细胞的生物学特性；转染后的L02细胞与大鼠脾脏细胞共培养，通过检测脾脏细胞增殖情况评价表达CTLA4Ig的L02细胞在体外的免疫耐受活性；收集共培养体系中的大鼠脾脏细胞，再分别与正常L02细胞、HeLa细胞共培养，检测脾细胞增殖情况以评价转染后L02细胞免疫耐受的特异性。　结果　转染后的L02细胞可在细胞质内大量表达CTLA4Ig蛋白，并分泌至培养上清中；转染后L02细胞生长速度无明显改变（P>0.05）,单个细胞尿素合成能明显升高[(0.56±0.01)pmol/d，P<0.01]；转染后的L02细胞在体外可显著抑制大鼠脾脏细胞的增殖（抑制率约为36.8%,P<0.05），被抑制后的大鼠脾脏细胞在正常L02细胞刺激下增殖较低，但在HeLa细胞刺激下则可显著增殖(P<0.01)。　结论　Ad-CTLA4Ig-EGFP转染后的L02细胞可表达具有生物学活性的CTLA4Ig，并在体外表现出显著的具有抗原特异性的免疫抑制活性。