核仁磷酸蛋白突变基因表达对NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨核仁磷酸蛋白（nucleophosmin,NPM）突变基因对小鼠NIH3T3成纤维细胞系体外增殖和凋亡的影响以及其分子机制。　方法　通过脂质体介导将真核表达载体pEGFP-C1-NPMc+转染NIH3T3细胞，G418筛选稳定表达NPM突变蛋白细胞株，RT-PCR和Westernblot检测NPM突变基因和蛋白的表达。MTT、克隆形成实验检测细胞体外增殖能力；FCM检测细胞周期分布及凋亡水平的改变，并通过对周期调控因子p21及凋亡相关分子Caspase-3活性检测，初步探讨NPM突变参与细胞恶性增殖的分子机制。　结果　建立了稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞株。NPM-mA实验组细胞较对照组细胞增殖能力及平板克隆形成率明显增高（P<0.05）；甲基纤维素集落形成实验显示各组细胞在甲基纤维素上均不能形成集落；与对照组比较,NPM-mA实验组细胞中G1期细胞比例（42.27±0.86）%显著减低（P<0.01），S期细胞比例（43.08±0.74）%显著增加（P<0.01），同时伴有p21mRNA水平下降,稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞凋亡率（1.00±0.13）%明显降低（P<0.01），Caspase-3活性（0.784±0.080）下降（P<0.01）。　结论　NPM突变基因可促进NIH3T3细胞体外增殖，抑制细胞凋亡发生。