人外周血中NF-κBp65定量检测方法的建立及临床应用

目的建立一种能定量测定人外周血中核转录因子-κB(nucleartranscriptionfactor-kappaB，NF-κB)p65活化量的检测方法。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，从细胞核成分中提取核蛋白，应用Bradford法进行核蛋白定量，以识别NF-κBp65不同抗原表位的2种抗NF-κB单克隆抗体为基础，建立可定量检测人外周血NF-κBp65活化量水平的双抗体夹心酶联免疫吸附实验法。应用已建立的NF-κBp65定量检测方法测定了68例微小病变型肾病综合征患者和20名健康人外周血中NF-κBp65活化量。结果本方法批内、批间变异系数分别为（9.78±3.99）%、（12.51±4.53）%，灵敏度为0.030mg/L，平均回收率为95.8%。与NF-κB突变型寡核苷酸不发生交叉反应。微小病变型肾病综合征患者治疗前外周血中NF-κBp65活化量较健康人显著增高（P＜0.01），治疗后与治疗前NF-κBp65活化量差异有统计学意义（P＜0.01），但与健康人NF-κBp65活化量差异无统计学意义（P＞0.05）。结论本研究建立的人外周血中NF-κBp65活化量定量检测方法快速、特异且可靠，为临床监测NF-κBp65活化情况提供了条件。