大鼠海马神经干细胞的扩增及与三维微小凹图式复合的研究

目的比较2种培养基下海马神经干细胞(neuralstemcells，NSCs)的生长特性，进而实现海马NSCs扩增的优化及其与聚乳酸（poly-L-lactide,PLLA）三维微小凹图式的复合。方法分离大鼠胚胎海马细胞并采用Neurobasal为基础的培养基和DMEM/F12为基础的培养基进行扩增。以四甲基氮唑蓝(MTT)比色法及神经球数目统计法评价2种培养基下细胞增殖行为。采用紫外光光刻、硅蚀刻及软光刻技术制备PLLA三维微小凹图式并实现海马NSCs与微小凹图式的复合。结果原代分离的海马细胞呈神经干细胞标志物阳性并能向神经元系和胶质细胞系分化。在30d的扩增时间内，海马NSCs在以Neurobasal为基础的培养基中缓慢扩增聚集成神经球，少见细胞贴壁及分化；在以DMEM/F12为基础的培养基中海马NSCs扩增迅速，但易贴壁和分化。培养第25天时后者神经球数量为前者的4.7倍。微加工制备的微小凹图式结构清晰、稳定，具有高纵横结构比（≥1）。扩增的海马NSCs能在三维微小凹图式上成功复合生长。结论以DMEM/F12为基础的培养基有利于大鼠海马NSCs的扩增，以Neurobasal为基础的培养基利于海马NSCs的纯化。序贯应用2种培养基可有效扩增海马NSCs并实现其与三维微小凹图式的复合。