不同活性的survivin基因启动子片段的克隆及鉴定

目的检测survivin在成体干细胞等细胞中的表达差异，克隆并比较3种不同片段长度survivin启动子的活性。方法取成纤维母细胞10T1/2、成肌母细胞C2C12、真皮多能干细胞DMSC、人骨髓间充质干细胞BMSC、结肠腺癌细胞HT29、人胚肾母细胞293FT进行培养。用RT-PCR和免疫细胞化学染色检测survivin在成体干细胞和肿瘤细胞中的表达；用基因组DNAPCR和分子克隆等方法，构建不同长度的survivin基因启动子驱动荧光素酶报告基因表达的载体，经脂质体转染293FT细胞，测定相对荧光素酶活性以反映启动子活性。结果survivin基因在正常成体干细胞中低表达，在成肌母细胞中中度表达，在结肠腺癌细胞HT29中高表达。克隆了不同片段长度的survivin基因启动子，并连接到荧光素酶cDNA上游。在293FT细胞中，987bp和160bp的survivin基因启动子活性高于270bp的survivin启动子的活性。结论survivin基因启动子由于肿瘤特异性和泛肿瘤表达的特点，可通过载体构建应用于监控和治疗移植后干细胞的恶性转化。用高活性survivin基因启动子构建的载体可能会提高其在监控和治疗中的效果。