二氮嗪干预氧化应激介导的INS-1细胞KATP通道作用机制的研究

目的研究二氮嗪（diazoxide，DIZ）干预氧化应激对INS-1细胞ATP敏感性钾通道（Adenosinetriphosphate-sensitivepotassiumchannels，KATPchannels）SUR1亚基基因的表达影响。方法将INS-1细胞株分为：①氧化应激组：将50、100、200、400μmol/LH2O2分别加入各瓶细胞中培养3h；②二氮嗪干预组：加入50μmol/L二氮嗪培养INS-1细胞30min后，加入400μmol/LH2O2，继续培养3h；③牛磺酸干预组：加入1mmol/L牛磺酸培养INS-1细胞30min后，加入400μmol/LH2O2，继续培养3h；④空白对照组：不加二氮嗪、牛磺酸及H2O2，其他培养条件相同。MTT检测氧化应激组细胞存活率、Elisa检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌（glucose-stimulatedinsulinsecretion，GSIS）、Westernblot分别检测3组各SUR1亚基蛋白的表达。结果H2O2处理INS-1细胞3h与对照组相比较后50μmol/L组细胞存活率（105.27±3.83）%稍升高（P<0.05），200μmol/L组、400μmol/L组细胞存活率分别为68.66%和51.67%均显著降低（P<0.05、P<0.01）；与对照组（112.87±9.28）mU/L相比较，50μmol/LH2O2组GSIS量（118.47±10.15）mU/L升高（P<0.05）;200μmol/L组（85.79±7.03）mU/L、400μmol/L组（64.59±4.53）mU/L细胞均显著降低（P<0.05，P<0.01）；不同浓度H2O2培养INS-1细胞3h后SUR1亚基蛋白的表达50μmol/L组较正常组有升高（P<0.05），100μmol/LH2O2组较正常组无统计学差异，200、400μmol/L组比对照组明显升高（P<0.05）；二氮嗪干预组SUR1亚基蛋白表达比对照组显著升高（P<0.01），牛磺酸干预组与对照组比较无明显升高（P>0.05）。结论低浓度H2O2可以促进细胞增殖与胰岛素分泌，中、高浓度H2O2抑制细胞增殖与胰岛素分泌，二氮嗪抑制细胞KATP通道SUR1亚基的表达，可能是通过抑制线粒体呼吸链电子转运抑制ROS的释放，减轻细胞氧化应激的程度。