hsa-mir-520真核表达载体的构建及对E-钙粘蛋白表达的影响

目的构建hsa-mir-520真核表达载体，并转染大肠癌细胞SW-480细胞，检测细胞中E-钙粘蛋白表达情况。方法依据miRBase数据库中hsa-mir-520序列，设计并合成寡核苷酸片段，构建hsa-mir-520表达载体和对照载体。采用脂质体转染方法分别将mir-520表达载体、及对照质粒转染大肠癌细胞SW-480细胞株。采用酶切、测序检测载体构建；Westernblot检测E-钙粘蛋白的表达。结果酶切和测序表明hsa-mir-520真核表达载体构建成功。Westernblot结果显示与转染对照质粒和未转染的细胞相比，转染了hsa-mir-520重组质粒的细胞中E-cadherin蛋白的表达明显增加（P<0.01），密度扫描半定量分析显示E-cadherin蛋白的表达增加了大约40%。结论成功构建了hsa-mir-520和对照的真核表达载体，hsa-mir-520质粒转染大肠癌细胞SW-480后可增加E-钙粘蛋白的表达。