甲基-β-环糊精对肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖和TGF-β/Smad信号通路的影响

目的观察甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrin，MβCD)破坏小窝（caveolae）对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)增殖和TGF-β/Smad信号通路的影响。方法分离培养大鼠AECⅡ，免疫荧光双标检测小窝蛋白-1（caveolin-1）和TGF-β受体Ⅰ(TβR-Ⅰ)表达和分布关系。以MβCD（5mmol/L）破坏AECⅡ细胞膜Caveolae，设空白对照组，非离子去污剂法提取脂筏检测TβR-Ⅰ与Caveolin-1在细胞膜上的分布；Westernblot检测Caveolin-1和磷酸化Smad2（pSmad2）表达；四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力。结果荧光双标和脂筏提取结果提示TβR-Ⅰ主要分布于Caveolae区域，MβCD破坏Caveolae后，TβR-Ⅰ重新分布于细胞膜上非脂筏区域；MβCD干扰组Caveolin-1蛋白表达（24.53±3.24）%较正常对照组（54.83±5.67）%显著下调(P<0.01)，而TGF-β/Smad信号通路下游分子pSmad2蛋白表达（10.93±1.11）%较对照组（8.36±0.64）%上调（P<0.05）；MβCD干扰组细胞增殖率（31.00±4.18）%较对照组（49.20±4.44）%显著降低（P<0.01）。结论MβCD破坏Caveolae结构可抑制AECⅡ增殖，其机制可能与TβR-Ⅰ在非脂筏区域的聚集和Caveolin-1下调导致的TGF-β/Smad信号通路增强有关。