抗preS1分子高效单克隆抗体的制备及其在血清LHBs检测中的应用

目的制备可用于血清LHBs检测的针对preS1高效单克隆抗体并进行初步临床应用研究。方法对乙肝preS1区段基因（B基因型，adr血清亚型）全长序列（1~119aa）进行密码子偏嗜性改造后，克隆入质粒pET32a构建原核表达重组质粒并转化入大肠杆菌BL21(DE3),采用离子交换、HIS亲和层析柱以及肠激酶(EK酶)酶切等方法建立preS1重组蛋白的纯化工艺,制备筛选单克隆抗体的筛选原；综合应用多种生物信息学分析软件预测LHBspreS1区段B细胞表位肽preS1（36~58aa），合成该肽段后与BSA交联，通过新型免疫程序制备单克隆抗体；建立以抗preS1高效单克隆抗体为基础的ELISA方法，并对临床血清LHBs进行检测分析。结果获得了高纯度的重组preS1蛋白，HPLC分析其纯度为98%，通过新型免疫程序制备的抗preS1单克隆抗体1-E6(IgG1)特异性好，对preS1(LHBs)的检出率(83.3%)高于其他同类抗体(P<0.01)。结论获得高效特异的抗preS1单克隆抗体1-E6以及高纯度重组preS1蛋白免疫检测标准品。