缺氧-复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞中钠氢交换体-1的表达及活性影响

目的探讨缺氧-复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞（ratmyocardialmicrovascularendothelialcells,RMMEVCs）中缺氧诱导因子-1（hypoxia-induciblefactor-1,HIF-1）表达以及钠氢交换体-1（hydrogenexchanger-1,NHE1）的表达及活性的影响。方法蛋白印迹检测缺氧培养的RMMVECs的HIF-1、NHE1蛋白水平表达，并用氯化钴模拟缺氧进行验证。进而BCECF/AM法检测细胞内pH值、酸负荷后pH回复率及对NHE1特异阻断剂DMA的反应。复氧0、24、48h后检测缺氧影响作用的回复情况。结果缺氧导致RMMVECs中HIF-1、NHE1蛋白表达水平升高，氯化钴模拟缺氧证实NHE1表达亦升高。但缺氧致细胞内pH值下降[0h(7.42±0.06)；12h(7.17±0.05)；24h(7.04±0.04)；P<0.01]，酸负荷后细胞内pH值回复率减小[(U/min)0h(0.106±0.007)；12h(0.059±0.005)；24h(0.044±0.004)；P<0.01]；相对于DMA未处理组，不同缺氧时间点DMA处理组的酸负荷后pH回复率均降低[(U/min)0h，-0.063；12h，-0.028；24h，-0.020]。复氧后NHE1蛋白水平逐渐下降，但复氧24h酸负荷后细胞内pH值回复率最高（0.119U/min），DMA抑制幅度最明显（-0.076U/min），与0、48h比较差异显著（P<0.01）。结论在缺氧中HIF-1升高可能导致NHE1蛋白表达升高，但NHE1活性降低，而复氧后NHE1活性升高。NHE1表达与活性改变可能是RMMVECs缺氧中pH调节的重要机制。