过表达人RI抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭、转移及EMT发生

目的检测过表达人核糖核酸酶抑制因子(ribonucleaseinhibitor，RI)基因的质粒pIRES2-EGFP-RI对人膀胱癌T24细胞侵袭转移及上皮细胞间质转化（epithelialmesenchymaltransition，EMT）现象的影响。方法将连有RI的质粒pIRES2-EGFP-RI稳定转染T24细胞后利用G418筛选出阳性克隆。根据转染的质粒不同分为3组：T24组（未转染组）、T24-0（转染pIRES2-EGFP质粒）和T24-RI组（转染pIRES2-EGFP-RI质粒）。RT-PCR检测T24细胞中RI的mRNA水平变化，细胞免疫荧光及Westernblot检测RI蛋白的表达，利用HE染色观察其细胞形态的变化，Transwell方法检测细胞侵袭及转移能力的变化，Westernblot检测侵袭转移及EMT相关蛋白Twist、MMP-9和Snail及E-cadherin的表达，构建移植瘤模型，利用HE染色观测肺组织切片癌细胞转移情况，组织免疫化学方法检测移植瘤中RI、Twist、Snail及E-cadherin的表达。结果T24-RI组人RI的mRNA水平及蛋白表达显著升高(P<0.05)；HE染色结果表明细胞铺展良好，核质比明显减小，细胞由间质形态向上皮形态转变；Transwell方法显示T24-RI组细胞的侵袭及转移能力较T24组、T24-0组明显下降；Westernblot结果表明T24-RI组Twist、MMP-9和Snail较T24组、T24-0组显著降低(P<0.01),E-cadherin较T24组、T24-0组显著升高(P<0.01)；HE染色肺组织切片显示T24-RI组较其他两组癌细胞转移降低，组织免疫化学结果表明T24-RI组RI、E-cadherin蛋白明显升高，而Twist、Snail显著降低。结论过表达人RI载体提高了RI蛋白的表达水平，并抑制了人膀胱癌T24细胞EMT的发生，从而抑制了膀胱癌T24细胞的侵袭、转移。