miR-34a靶向调控NOTCH1基因对SW480细胞增殖的影响

目的探讨miR-34a靶向调控NOTCH1基因表达而对结肠癌SW480细胞增殖的影响。方法通过生物信息学预测，NOTCH1为miR-34a特异性靶基因。构建含miR-34a结合位点的NOTCH1基因3′-UTR域荧光素酶报告载体。通过荧光素酶报告载体系统检测miR-34a与NOTCH1的3′-UTR相互作用对荧光素酶活性的影响；免疫印迹技术检测miR-34a对NOTCH1蛋白表达的影响。采用MTT法及流式细胞检测转染miR-34a对SW480细胞增殖的影响。结果经过酶切及基因测序鉴定，NOTCH1基因3′-UTR序列的双荧光素酶报告重组质粒构建成功；荧光素酶结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物和重组载体，荧光素酶的活性是只加入空载体的SW480组53.4%（P=0.0038）;而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物和重组载体，荧光素酶的活性是只加入空载体的HEK293组145%（P=0.0021）,说明miR-34a有与NOTCH1的3′-UTR位点相结合。免疫印迹结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物，NOTCH1蛋白的表达水平是未处理SW480组下降53.6%（P<0.05）;而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物，NOTCH1蛋白的表达水平较未处理HEK293组升高78.9%（P=0.03）,说明miR-34a负性调控NOTCH1蛋白的表达。miR-34a过表达的SW480细胞较未处理的SW480的生长速度明显减慢（P<0.05），且阻滞在G0~G1期，说明miR-34a过表达后能抑制SW480细胞增殖。结论miR-34a负性靶向调控NOTCH1基因的表达而抑制SW480细胞的增殖。