MDR相关新基因CA916798真核表达载体的构建及其对H446细胞增殖的影响

目的构建新基因CA916798真核表达载体，并观察其对H446增殖的影响。方法以人A549细胞总RNA为模板，用RT-PCR技术扩增获得CA916798开放阅读框序列，连接入pBluescriptⅡSK克隆载体上，将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒，酶切与DNA测序鉴定准确，再用双酶切方法将CA916798开放阅读框序列定向连接到真核表达载体pQE-Trisystem中，构成pQE-Tri-CA916798，将pQE-Tri-CA916798转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒，双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确，脂质体转染人小细胞肺癌细胞系H446细胞，选取稳定转染不同质粒的H446细胞，采用MTT绘制细胞增殖曲线，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果扩增出CA916798开放阅读框序列，大小约为350bp，重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致，测序结果完全正确。转染了pQE-Tri-CA916798的H446细胞顺铂作用后增殖速度加快，凋亡率下降。结论成功构建了pQE-Tri-CA916798真核表达质粒，并初步证实了其与顺铂诱导的肺癌多药耐药相关。