Muc3羧基端内SEA组件的蛋白酶切与N糖基化关系的研究

目的Muc3的羧基端在翻译后经历了蛋白酶切反应，探讨Muc3的羧基端蛋白酶切反应发生是否与其羧基端内的N型糖链有关。方法截断了的Muc3的羧基端（含完整的SEA组件）（p20SEA）采用定点突变方法在所要求的位点插入终止密码子，所表达蛋白质的检测采用pulse/chase和免疫共沉淀方法或SDS/PAGE和Western印迹方法，所表达蛋白质的N型糖链合成抑制采用Tunicamycin处理转染的COS-1细胞。结果p20表达产物（完整的Muc3羧基端产物）经历了翻译后蛋白酶切，产生30×103的氨基端酶切片段和49×103的羧基端酶切片段；Tunicamycin处理后主要的表达蛋白是60×103的全长的非糖基化产物，22×103的少量氨基端酶切片段和41×103的羧基端酶切片段；p20SEA表达产物（含完整的SEA组件但不含SEA组件后续氨基酸的截断Muc3羧基端）抑制N型糖链出现未酶切的36×103全长产物和22×103酶切的非N糖基化产物。结论大鼠Muc3羧基端在抑制其N型糖链合成后出现Muc3的羧基端蛋白酶切的抑制。