人β3肾上腺素受体真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR的构建及表达

目的构建人β3肾上腺素受体（β3-AR)的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR，并通过脂质体介导转染HEK293细胞使之表达该受体蛋白。方法以pENTR_ADRB3-Stop质粒为模板，采用PCR法扩增出人β3-ARcDNA，将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中，构建成真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR。将该质粒转染HEK293真核细胞，通过RT-PCR检测β3-ARmRNA在HEK293细胞内的表达，通过免疫荧光法检测β3-AR蛋白在HEK293细胞中的表达。结果酶切和DNA测序鉴定均证实重组质粒含有人β3-AR编码区全长。在转染重组质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR的HEK293细胞中检测到了β3-AR基因的转录和翻译产物。结论通过基因工程方法成功构建了β3-AR的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR，为进一步建立β3-AR的稳定表达细胞株，用于筛选高效、高选择性β3-AR激动剂奠定了基础。