小鼠FSH-Occludin重组多价避孕疫苗的构建及表达

目的构建FSH与Occludin重组基因的毕赤酵母分泌型表达载体。方法利用RT-PCR技术，从小鼠新鲜脑组织中提取总RNA扩增获得FSH-β亚单位，同法从小鼠新鲜睾丸组织中提取总RNA扩增Occludin，通过双重PCR扩增，获得含FSH-β亚单位特定基因序列和闭锁因子第2个胞外环序列的耦合片段,构建两种重组质粒pPIC9KFSH-Occludin；经酶切鉴定后电转化毕赤酵母菌株GS115，YPD-G418平板筛选高拷贝转化子，甲醇诱导后SDS-PAGE电泳鉴定。结果通过双酶切分析、DNA测序鉴定明确特定的FSH-β亚单位和Occludin基因耦合片段序列与设计完全一致。目的蛋白相对分子质量分别约为14×103与12×103,与理论预测值相吻合;Westernblot检测具有良好的免疫反应性。结论耦合片段被成功克隆到巴氏毕赤酵母表达载体pPIC9K中并高效、正确的表达。