hTERT基因转染显著延长人骨髓间充质干细胞增殖能力的实验研究

目的构建含有端粒酶逆转录酶（humantelomerasereversetranscriptase，hTERT）基因的逆转录病毒，感染人骨髓间充质干细胞（humanmesenchymalstemcells,hMSCs），观察外源性hTERT基因在hMSCs中的表达及其对hMSCs端粒酶活性和细胞增殖能力的影响。方法构建pLXSN-hTERT质粒，BamHⅠ酶切和测序鉴定，转染PT67包装细胞，G418抗性筛选获得产病毒阳性细胞克隆。用产病毒细胞珠和hMSCs共培养的方法转染hMSCs，G418抗性筛选。以未转染hMSCs作为对照，用TRAPEZE方法检测hTERT基因转染hMSCs的端粒酶活性，用流式细胞仪检测细胞周期，并观察转染hMSCs的生长情况。结果成功构建了hTERT基因重组pLXSN-hTERT质粒，建立了产病毒pLXSN-hTER-PT67细胞株。获得了hTERT-hMSCs细胞群，与未转染的hMSCs相比，hTERT-hMSCs细胞群端粒酶活性明显增强，hTERT蛋白阳性表达细胞百分率提高，细胞的生命周期显著延长，细胞传代至46代，形态无明显改变，生长良好。结论逆转录病毒载体介导的hTERT基因转染可增强hMSCs的端粒酶活性，提高hMSCs的增殖能力。