EB病毒LMP1C端原核表达质粒的构建

目的通过巢式PCR技术扩增EB病毒LMP1C端,并构建其原核表达重组质粒，经诱导获得EB病毒LMP1C端蛋白。方法用巢式PCR技术,从B95-8细胞中扩增EBV-LMP1exoncDNA，克隆至pET-32a载体，转化入原核表达菌BL21，IPTG诱导重组菌株表达，用SDS-PAGE与Westernblot对表达产物进行鉴定。结果巢式PCR扩增的LMP1exoncDNA长度为801bp，测序结果与LMP1C端cDNA序列吻合，诱导pET-32a-LMP1c重组原核表达菌株获得大小约48×103的LMP1C端融合蛋白,Westernblot表明重组蛋白能与LMP1单克隆抗体特异结合。结论通过巢式PCR成功构建了原核表达载体，获得的EB病毒LMP1C端融合蛋白为制备国产LMP1单克隆抗体，研究LMP1致瘤机制奠定了基础。