小鼠FasL全长cDNA的克隆、真核表达载体构建及其在树突状细胞中的表达

目的克隆小鼠FasL(mouseFasL,mFasL)全长cDNA，构建其真核表达载体，并验证其在小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendriticcells,DC)中的表达。方法采用RT-PCR和TA克隆技术，从激活的小鼠脾脏T淋巴细胞中扩增mFasL全长cDNA，亚克隆到T载体中，再克隆到pIRES2EGFP载体中。转染小鼠DC后，用RT-PCR、免疫荧光及Westernblot检测mFasLmRNA和蛋白表达。结果测序证实所得的mFasLcDNA序列与其在GenBank中的序列完全一致。mFasL真核表达载体转染小鼠DC后，能表达mFasLmRNA和蛋白。结论成功克隆了mFasL基因，构建其真核表达载体，并证明能有效表达于DC中。