T-bet和c-FLIP双基因共表达质粒的构建及生物学活性检测

目的构建携带T-bet和c-FLIP双基因的真核表达载体及检测其生物学活性。方法采用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出T-bet和c-FLIPcDNA，利用pIRES和pEGFP-C1，构建T-bet和c-FLIP双基因真核表达载体pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP。采用非脂质体的脂质型介导载体将pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP转染至外周血淋巴细胞，观察T-bet和c-FLIP在外周血淋巴细胞中的表达，并检测其诱导淋巴细胞的抗凋亡作用及Th1/Th2细胞偏移。结果成功构建pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP质粒，运用非脂质体的脂质型介导载体将该质粒转染淋巴细胞，其转染率为34.6%。流式细胞仪分析未经pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP预处理的淋巴细胞在CH-11作用24h后，细胞的凋亡率分别为（50.12±8.02）%；经pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP预处理1d的淋巴细胞，其细胞凋亡率分别下降到（5.73±0.37）%；双基因表达的淋巴细胞的Th1型细胞因子IFN-γ表达水平明显高于空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞组（P<0.01），且Th2型细胞因子IL-4表达水平较空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞低（P<0.01），差异有统计学意义。结论转染T-bet和c-FLIP共表达基因后的T淋巴细胞可产生抗凋亡作用及向Th1细胞分化。