AP-1活化在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨转录活化蛋白-1（activatorprotein-1,AP-1）在高糖诱导的肾小管上皮细胞表型转化中的作用。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞（humankidneyproximaltubularepithelialcell,HK2）分为正常对照组、高糖组、AP-1阻断组。光镜、透射电镜观察细胞形态的改变，免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和细胞角蛋白（cytokeratin，CK)的表达，用凝胶电泳迁移率改变分析法（electrophoreticmobilityshiftassay，EMSA）检测HK2细胞AP-1的改变，RT-PCR法检测CKmRNA的表达，Westernblot检测α-SMA蛋白的表达。结果高糖作用48h后，HK2细胞由椭圆形贴壁生长变为长梭形，胞体拉长，透射电镜下，细胞表面微绒毛明显减少，胞质内粗面内质网丰富，而AP-1阻断组较高糖组明显减轻；EMSA结果分析表明，在高糖刺激下，AP-1结合活力较正常对照组增加79.22%（P<0.05），而AP-1阻断剂可明显抑制AP-1的活化，较高糖组降低51.19%（P<0.05）；免疫细胞化学和RT-PCR检测显示，高糖组和AP-1阻断组CKmRNA和蛋白水平明显降低（P<0.05），而AP-1阻断组显著高于高糖组（P<0.05）；免疫细胞化学和Westernblot检测显示，高糖组和AP-1阻断组α-SMA蛋白表达明显高于正常组（P<0.05），而AP-1阻断组显著低于高糖组（P<0.05）。结论高糖能够导致肾小管上皮细胞AP-1活化，诱导其表型转化。