在体诱导表皮细胞去分化的初步实验研究

目的在体诱导表皮细胞去分化，探索与表皮细胞去分化有关的信号通路。方法包皮皮片去除皮下组织，用中性蛋白酶分离表皮，Ⅳ型胶原反复粘贴并牵拉表皮去除基底细胞层。处理后表皮片移植于裸鼠全层皮肤下，分别于3、5、7d取出移植皮片，采用免疫组织化学染色、流式细胞仪检测、Westernblot和RT-PCR等方法检测皮片移植前后表型的改变和ERKMAPK通路各信号分子表达的变化情况。结果去基底细胞层处理的表皮片干细胞标志物CK19和β1整合素染色阴性；移植后5d，存活皮片CK19和β1整合素染色呈多层分布，而不是正常表皮中的单层分布。流式细胞仪检测结果显示，表皮片移植后CK19阳性细胞和β1整合素阳性细胞由移植前的0.00%分别增加到7.54%和5.24%，而CK10阳性细胞由99.62%下降为86.56%。Westernblot和PCR检测也证实CK19和β1整合素蛋白水平和mRNA水平表达在移植后明显增强。ERK及上下游信号分子（p-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-myc）表达增强。t-MEK1/2和t-ERK1/2移植前后表达无显著差异(P>0.05)。结论处于终末分化阶段的表皮细胞可以向干细胞状态逆转，这个过程可能与ERKMAPK信号通路有关。