MLC20磷酸化在PKCα、PKCε调节失血性休克大鼠血管钙敏感性中的作用

目的观察肌球蛋白轻链（MLC20）磷酸化在蛋白激酶Cα（proteinkinaseCα,PKCα）、蛋白激酶Cε（proteinkinaseCε,PKCε）调节大鼠失血性休克后血管钙敏感性中的作用，进一步探讨休克血管钙失敏的发生机制。方法采用缺氧大鼠血管平滑肌细胞（vascularsmoothmusclecell，VSMC）和失血性休克后大鼠肠系膜上动脉（superiormesentericartery，SMA），运用Westernblot、底物磷酸化等技术方法，观察PKCα、PKCε激动剂作用下，以及抑制CPI-17、ILK、ZIPK后再给予PKCα、PKCε激动剂时，肌球蛋白轻链磷酸酶（myosinlightchainphosphatase，MLCP）活性和MLC20磷酸化的变化。结果①缺氧2h后VSMC中MLCP活性增高至正常对照的150.1％（P<0.01），PKCα、PKCε激动剂可显著抑制其增高，使其分别降低至正常对照的103.0％和96.3％（P<0.01），抑制CPI-17、ILK、ZIPK，可显著抑制PKCα激动剂降低MLCP活性的作用，使其分别增高至正常对照的136.7％、127.6％和116.7％（P<0.01）；抑制CPI-17、ILK、ZIPK，也可显著抑制PKCε激动剂降低MLCP活性的作用，使其分别增高至134.0％、128.5％和126.0％（P<0.01）。②失血性休克2h后SMA中MLC20磷酸化水平由32.4%显著降低至10.4%（P<0.01），PKCα、PKCε激动剂可显著抑制其降低，使其分别增高至26.4%和25.6%（P<0.01），抑制CPI-17、ILK、ZIPK，可显著削弱PKCα激动剂的增高MLC20磷酸化的作用，使其分别降低至12.7%、10.0%和15.7%（P<0.01）；也可显著削弱PKCε激动剂增高MLC20磷酸化的作用，使其分别降低至10.1%、12.5%和10.3%（P<0.01）。结论PKCα、PKCε可能通过CPI-17、ILK、ZIPK调节MLCP活性和MLC20磷酸化，调节失血性休克血管平滑肌的钙敏感性。