RNAi沉默survivin基因表达对膀胱癌EJ细胞增殖的影响

目的通过RNA干扰(RNAi)阻断EJ细胞中survivin基因的表达,研究survivin基因沉默后对细胞生长和细胞凋亡的影响。方法将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencer2.0线性质粒以T4DNA连接酶连接,重组质粒经酶切、DNA测序鉴定后,用脂质体法转染EJ细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果。MTT法检测细胞生长的影响，流式细胞仪检测转染后EJ细胞的凋亡变化。结果酶切及测序证实设计合成的DNA片段已正确插入载体。RT-PCR、免疫印迹检测实验表明：pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2重组载体均能有效地阻断EJ细胞中survivin基因的表达,使survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P<0.01)，后者抑制效果更佳。转染后的EJ细胞生长速度明显变慢。转染pSilencer2.0-SVV2实验组细胞的凋亡增加了17.0%。结论重组真核载体能有效抑制EJ细胞的survivin表达，抑制细胞的增殖，诱导细胞凋亡。