肠出血性大肠杆菌O157∶H7LexA蛋白的表达、纯化及鉴定

目的对EHECO157∶H7LexA进行表达、纯化，并检测其免疫活性。方法lexA基因片段插入表达载体pET22b(+)，在E.coliBL21(DE3)中表达。包涵体经洗涤并用8mol/L尿素溶解，HeparinAgrose亲合柱层析为第一步纯化，Superdex75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化，HPLC测定LexA蛋白的浓度，将纯化的LexA蛋白经注射途径免疫家兔，制备兔抗lexA血清，采用免疫双扩、ELISA及Westernblot分析LexA的免疫活性。结果lexA以包涵体形式表达，表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经HeparinAgrose亲合柱层析和凝胶过滤层析两步组合纯化目的蛋白，经HPLC测定目的蛋白的最终纯度为98%，表达及纯化的lexA具有良好的免疫活性。结论在E.coliBL21(DE3)中表达的LexA蛋白具有良好的免疫活性。