高效稳定表达人缺氧诱导因子抑制因子肠上皮细胞株的建立

目的通过转染含有人FIH全长cDNA的质粒pcDNA3.1-V5-His-A-FIH,建立FIH高效表达的肠上皮细胞株。方法对pcDNA3.1-V5-His-A-FIH进行扩增、提取，用脂质体Lipofectamine2000将pcDNA3.1-V5-His-A-FIH转入Caco-2细胞，经G418筛选并逐步传代，RT-PCR和Westernblot法检测阳性细胞克隆FIHmRNA和蛋白表达。结果转染pcDNA3.1-V5-His-A-FIH后Caco-2细胞FIHmRNA是普通Caco-2细胞的1.98倍，而FIH蛋白含量是普通Caco-2细胞的1.70倍。结论成功建立了高效、稳定表达人FIH基因的肠上皮细胞株。